染色法と細胞の同定｜【獣医師国家試験対策】

第73回〜第77回の試験問題を分析したところ、必須問題ではトルイジンブルー染色で異調染色性を示す細胞を問う設問が出題されています。

また実地試験では、血液塗抹（IMHAの球状赤血球、バベシア原虫の同定）、病理組織像、寄生虫卵や細菌の鏡検（犬鞭虫卵、繊毛虫、セロハンテープ法による虫卵、球菌の配列）といった顕微鏡写真の読影が繰り返し出題されています。

「染色法」の知識を直接問う設問、あるいは「特定の染色が施された写真（顕微鏡写真）」や「染色性の特徴」から細胞・病原体を同定し、疾患名や病態、治療法を答えさせる設問は、合計で54問出題されています。

1. 必須問題・学説試験（基礎知識・定義を問う問題）
特殊染色の選択や、染色された特定細胞・封入体の特徴を問う知識問題です。

組織染色の特徴と適応を問う問題
第73回 必須：真菌の検出に用いられる組織染色法として、適切なもの（グロコット染色）を選択させる問題。
第74回 学説A：墨汁染色により莢膜を明瞭に検出できる病原体（Cryptococcus neoformans ）を選択させる問題。
第75回 学説A：アポトーシスを検出・可視化する方法（TUNEL法）を選択させる問題。

染色性や細胞内封入体からの細胞・器官同定
第76回 必須：トルイジンブルー染色で異調染色性（メタクロマジー）を示す細胞（肥満細胞）を選択させる問題。
第76回 必須：ネグリ小体（狂犬病ウイルスによる細胞質内封入体）がみられる疾患を問う問題。
第77回 必須：神経細胞においてニッスル小体として観察される細胞小器官（粗面小胞体）を選択させる問題。
第77回 必須：ラッセル小体（免疫グロブリンの過剰蓄積）を有する細胞（モット細胞）を問う問題。

2. 実地試験（スライド画像や鏡検像から細胞・病原体を同定する問題）
配点が高い実地試験（1問2点）では、染色写真を見て細胞や原虫などを正しく判定する「ビジュアル読解力」が毎回4〜6つの症例（8〜12問）にわたって出題されます。

① 血液塗抹検査（ライトギムザ、ギムザ、ニューメチレンブルー染色など）
第74回実地D：重度貧血の犬。血液塗抹標本（ライトギムザ染色）における球状赤血球の出現などから、免疫介在性溶血性貧血（IMHA）を同定させる問題。
第74回実地D：貧血を呈した放牧子牛の末梢血液塗抹（ギムザ染色）から、赤血球上の病原体（Theileria orientalis ）を同定させる問題。
第74回実地D：去勢雄犬。血液塗抹像（ライトギムザ染色）から慢性リンパ球性白血病を同定させ、γグロブリン増加症等の病態を答えさせる問題。
第75回実地D：貧血を呈した猫。末梢血液塗抹標本（A：ライトギムザ、B：ニューメチレンブルー染色）から、赤血球にみられる変性ヘモグロビン（ハインツ小体）と、その誘因物質（アセトアミノフェン）を同定させる問題。
第77回実地D：貧血を呈したチワワ。血液塗抹像（ライトギムザ染色）にみられる赤血球形態異常（球状赤血球など）を同定させる問題。
第77回実地D：脾腫を認める犬。血液塗抹標本（ギムザ染色）における赤血球内のナシ状・対をなす虫体から、Babesia gibsoni 感染症を同定させる問題。

② 細針吸引細胞診（ライトギムザ、ギムザ、スタンプ標本）
第73回実地C：リンパ節の細針吸引細胞診像（ライトギムザ染色）から、未分化な巨大リンパ球の均一な増殖を認め、リンパ腫を同定させる問題。
第73回実地C：重度貧血・白血球減少を示す犬。骨髄および末梢血の塗抹標本（ライトギムザ、ペルオキシダーゼ染色）から、急性骨髄性白血病を同定させる問題。
第74回実地D：ラブラドール・レトリーバー。指の病変の吸引細胞診像（ライトギムザ染色）から、角化傾向のある奇異な上皮細胞を認め、扁平上皮癌を同定させる問題。
第74回実地D：肩頭側腫瘤の吸引細胞診像（ライトギムザ染色）から、好塩基性の大型異型リンパ球の増殖を認め、牛伝染性リンパ腫を同定させる問題。
第77回実地C：皮膚しこりの吸引細胞診像（ライトギムザ染色）から、異調染色性（紫赤色）を示す豊富な顆粒を持った細胞を認め、肥満細胞腫を同定させる問題。
第77回実地C：猫の口腔内腫瘤。細胞診像（ライトギムザ染色）から、多核で奇怪な細胞質を示す上皮系悪性腫瘍細胞（扁平上皮癌）を同定させる問題。

③ 病理組織検査（HE染色・免疫組織化学等）および特殊染色
第74回実地D：突然死した牛の血液塗抹。加温しつつマラカイトグリーンで芽胞染色を施し、サフラニンで後染色した鏡検像から、炭疽菌の芽胞（緑色）と菌体（赤色）を同定させ、炭疽と診断させる問題。
第75回実地C：猫の皮膚病変スタンプ標本。赤く美しく染まる抗酸菌を認めるチール・ネルゼン染色像から、病原体（抗酸菌）および疾患（猫ハンセン病など）を同定させる問題。
第75回実地C：死亡したヌードマウス。肺胞内を埋める泡沫状の滲出物。メテナミン銀染色像（黒染されるシスト）から、Pneumocystis 症を特定させる問題。
第76回実地C：食中毒患者の食品から分離したグラム陽性桿菌。卵黄反応陽性の発育像と、熱処理・芽胞形成を確認するグラム染色像から、原因菌（セレウス菌など）の性状を同定させる問題。
第77回実地D：肥育豚。排出された糞便の鍍銀染色（銀で黒染された特有のらせん菌）から、原因微生物（Brachyspira hyodysenteriae （豚赤痢））を特定させる問題。
第77回実地D：養殖ブリ筋肉。体側筋の塗抹標本（Uvitex 2B染色像で蛍光を発するシスト）から、胞子虫による疾患（ミクロスポリジウム症など）を同定させる問題。

染色法と細胞・病原体の同定問題は、「染色法の名称 ⇄ ターゲットとなる細胞や構造 ⇄ 鏡検時の視覚的特徴（色）」がきわめて論理的・画一的に結びついて出題されます。

グロコット染色 / メテナミン銀染色 ➡ 真菌（酵母・菌糸）やニューモシスチスを黒染する。
チール・ネルゼン（抗酸）染色 ➡ ヨーネ菌、結核菌、クリプトスポリジウムを赤染する。
トルイジンブルー染色 ➡ 肥満細胞を赤紫色（メタクロマジー）に染める。
鍍銀染色 ➡ スピロヘータ（豚赤痢菌など）を黒染する。
芽胞染色（マラカイトグリーン・サフラニン） ➡ 炭疽菌、ボツリヌス菌、ウェルシュ菌などの芽胞を緑、菌体を赤に染め分ける。